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高灵敏度的IL-6检测产品

高灵敏度的IL-6检测产品

IL-6 是白细胞介素的一种,在机体中可发挥促炎和抗炎两种功能,是一种 典型的前炎性细胞因子,由 IL-6 基因编码。T 细胞和巨噬细胞在遭遇病原体等 外来物质入侵时,会进行分化增殖,产生大量 IL-6,刺激机体产生免疫应答, 在感染、创伤、烧伤或其它组织损伤导致的炎症部位,IL-6 水平会显著性上调。 IL-6 可通过 TNF-alpha 和 IL-1 进行负反馈调节,通过 IL-1ra 和 IL-10 进行正反 馈调节。在临床研究中,已发现 IL-6 与很多系统的疾病存在广泛的联系,如牙 周炎、急性心肌梗塞、妊娠期高血压、前列腺癌及肿瘤等。

随着 IL-6 研究的不断深入,公司开发了一系列不同物种 IL-6 的重组蛋白、抗体以及 ELISA 定量检测试剂盒,特别是针对样本中 IL-6 含量不高的问题,公司研发了具有高灵敏度的 IL-6 Elisa 检测试剂盒,并将试剂 盒中的高纯度、高特异性的单抗进行了商品化。

人 IL-6 天然蛋白全长 212 个氨基酸,分子量约为 24 kDa,因为前面 29 个 氨基酸是信号肽,选取了 Pro29~Met212 这一片段在 E.coli 中 进行表达得到重组蛋白。由于含有 GST 标签,重组蛋白分子量 约为 47kD,对重组蛋白进行 SDS-PAGE 验证其分子量以及纯度,如图 1。

用 重组蛋白免疫家兔并用偶联抗原的亲和柱层析进行纯化获 得高纯度的兔抗人 IL-6 多克隆抗体。将 与生物素 偶联得到生物素偶联多抗,带有生物素标记后,可更方便更直 接对体内外 IL-6 进行检测。通过 Western Blot 和 IHC 等方法对抗体进行验证。 用对血浆样本进行 WB 检测,结果如图 2 所示。用人肝脏组织进 行 IHC 检测结果展示于图 3 中,结果显示在人肝脏组织中该蛋白主要是分泌型。

在 IL-6 重组蛋白和及其抗体研发成功的基础上,研发了 IL-6 检测试剂盒,包括 Elisa 试剂盒以及化学发光试剂盒 。

但我们都知道 IL-6 在正常机体中含量很低,只有在感染、创伤烧伤或其它 组织损伤导致的炎症机体才会刺激 IL-6 的产生,所以许多生物样本 IL-6 含量很 低。针对这一问题,公司反复研究获得了高纯度,高特异性的小鼠抗人单克隆 抗体,它是由重组蛋白免疫小鼠并经过亲和层析纯 化得到,在进行 SDS-PAGE,WB 以及 IHC 时只需要微量就具有很高的检测能 力。

在高纯度,高特异性的单抗基础上,公司不断调整获得了具有高灵敏度的 IL-6 Elisa 检测试剂盒。灵敏度是指 20 个空白样品(即标准品稀释 液)测定的平均值加二倍标准差所对应的浓度。高敏试剂盒最低检测浓度为 0.156 pg/ml,灵敏度为 0.047 pg/ml;相较于 的 1.56 pg/ml,灵敏度 0.64 pg/ml, 提高了十倍或以上。

除了人 IL-6 的产品外,公司还成功开发了包括大小鼠、 兔、狗等 10 个物种约 70 种 IL-6 相关产品,有蛋白、抗体、生物素偶联抗体、 Elisa 试剂盒、化学发光试剂盒等,也有大鼠的高敏试剂盒,这些产品为研究不 同物种中 IL-6 的表达及功能提供了非常完善的技术支持。


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