内毒素(即lipopolysaccharides，LPS)是E.coli细胞壁的主要成分，传统的去除内毒素的方法是将内毒素和DNA一起纯化出来，然后再用各种方法去除其中的内毒素，操作繁琐，DNA回收率低。本产品可以直接把E.coli表面的内毒素去除，从根本上避免了内毒素对后续操作（如质粒DNA提取，重组蛋白质提取）的污染。本产品具有下列特点：

1. 首个在菌体收集阶段去除内毒素的产品，从源头上避免了内毒素跟DNA和胞浆蛋白的接触，从根本上防止了可能产生的污染。

2. 操作简单快速，用酶溶液温和清洗菌体3-4次即可去掉细菌表面的内毒素，只需要10分钟左右时间，不需要复杂仪器设备。

3. 高效，能去除99%以上的内毒素。

4. 跟各种质粒DNA提取、基因组DNA提取和蛋白质提取等操作兼容，DNA丢失率只有10%左右（其他方法DNA丢失率可以高达50%）。

5. 不影响DNA和绝大部分蛋白质的活性，处理过的质粒DNA可用于转染实验。

6. 既可小规模使用(在1.5 mL离心管内)，也可放量用于大规模无内毒素质粒DNA提取和无内毒素蛋白质纯化。

规格及成分

成份	编号	200 mL包装
本产品	90901	200 mL
使用手册	90901sc	1份

运输及保存

常温运输和保存，有效期一年。

自备试剂

无

使用方法

一：用于菌液小于3 mL的样品

1. 收集1.5-3 mL E.coli饱和菌液，12,000 rpm离心1分钟，弃上清，得到细菌沉淀。

2. 加入1 mL本产品温和混匀后10,000-12,000 rpm离心1分钟，弃上清（含内毒素）。

3. 再重复上述操作3-4次，得到的菌体可以直接进入后续的无内毒素质粒DNA提取或无内毒素蛋白质提取程序。

二：用于菌液多于3 mL的样品

整个操作同上，只是在15或50 mL 塑料离心管中进行，离心速度不能超过离心管的承受力，本产品的用量按比例增加。

常见问题

Q:为何用常规的方法很难去除生物样品中的内毒素?

A:因为内毒素带电性跟DNA和部分蛋白质相同，所以基于带电性的分离方法(如硅胶膜吸附，离子交换吸附)不能将它们分开;同时内毒素又是双性分子（类似于细胞膜的磷脂分子），能够形成大小不等的聚合物，跟质粒DNA和蛋白质大小接近，所以基于分子量大小的分离方法(如凝胶排阻过滤和氯化铯超速离心)也不能将其有效分离。

关联产品

固相内毒素清除剂（CAT#:60608）

背景资料

内毒素的分子结构

外毒素vs.内毒素

区别要点	外毒素（Exotoxin）	内毒素（Endotoxin）
存在部位	由活的细菌释放至细菌体外,为细菌的代谢产物	为细菌细胞外壁结构成份，细胞破裂后释出
细菌种类	以革兰氏阳性菌多见	革兰氏阴性菌多见
化学特性	蛋白质（分子量27～900 KDa），易被分解破坏，热不稳定（60℃以上能迅速破坏）	磷脂一多糖一蛋白质复合物（毒性主要为类脂A），不易被分解破坏，耐热（60℃耐受数小时）
毒性作用	强，微量对实验动物有致死作用（以ug计量）。各种外毒素有选择作用，引起特殊病变，不引起宿主发热反应。抑制蛋白质合成，有细胞毒性、神经毒性、紊乱水盐代谢等	稍弱，对实验动物致死作用的量比外毒素为大。各种细菌内素的毒性作用大致相同。引起发热、弥漫性血管内凝血、粒细胞减少血症、施瓦兹曼现象等
抗原性	强，可刺激机体产生高效价的抗毒素。经甲醛处理可脱毒成为类毒霉，仍有较强的抗原性，可用于人工自动免疫	弱，刺激机体对多糖成份产生抗体，不形成抗毒素，不能经甲醛处理成为类毒素而使毒性消失
其他	几乎无发热性，对肿瘤细胞无影响	很强的发热性，破坏肿瘤细胞
例子	白喉毒素，肉毒毒素，破伤风毒素厌氧菌毒素，溶血性链球菌毒素等	大肠杆菌，霍乱绿脓菌，沙门氏菌，赤痢菌等。