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人白介素6(IL-6)ELISA试剂盒

来源:人白介素6(IL-6)ELISA试剂盒说明书作者:试剂酶联网址:http://www.shjgogo.com/
文章附图

人白介素6(IL-6)检测试剂盒

使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

人白介素6(IL-6)ELISA试剂盒检测范围:                                                         96T

1.56-100pg/mL

灵敏度:0.58pg/mL

人白介素6(IL-6)ELISA试剂盒使用目的:

本试剂盒用于测定血清、血浆及相关液体样本中人白介素6(IL-6)含量

人白介素6(IL-6)ELISA试剂盒实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本人白介素6(IL-6)水平。用纯化的人白介素6(IL-6)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人白介素6(IL-6)再与HRP标记的人白介素6(IL-6)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人白介素6(IL-6)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品人白介素6(IL-6)浓度。

试剂盒组成:

Reagent

Quantity

标包被

12well×8strips

标准  100pg/mL

1×0.5ml

标准品稀释液

1×1.5ml

酶标试剂

1×6ml

样品稀释液

1×6ml

显色剂A

1×6ml

显色剂B

1×6ml

终止液

1×6ml

30倍浓缩洗涤液

1×20ml×30flod

说明书

1

封板膜

2

密封袋

1

样本处理及要求:

1.  血清:室温血液自然凝固  10-20  分钟,离心  20  分钟左右(2000-3000  /分)  。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2.  血浆:应根据标本的要求选择  EDTA  或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合  10-20  分钟后,离心 20  分钟左右(2000-3000  /分)  。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3.  尿液:用无菌管收集,离心  20  分钟左右(2000-3000  /分)  。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4.  细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心  20  分钟左右(2000-3000

/分)  。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用  PBSPH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到  100  /ml  左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心  20  分钟左右(2000-3000  /分)  。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5.  组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的  PBSPH7.4。用液氮迅速冷冻保

存备用。标本融化后仍然保持  2-8℃的温度。加入一定量的  PBSPH7.4)  ,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心  20  分钟左右(2000-3000  /分)  。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

6.  标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.

7.  不能检测含  NaN3  的样品,因  NaN3  抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤:

1. 标准品:其浓度为100pg/mL(贮液)。先将其稀释为100pg/mL(标准曲线最高浓度)后,再准备5个稀释标准品的EP 管,每个EP 管中加入150μL 的标准品稀释液,如图所示依次倍比稀释成100pg/mL50pg/mL25pg/mL12.5pg/mL6.25pg/mL3.12pg/mL,标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液

           

Tube

0

1

2

3

4

5

pg/mL

100pg/mL

50pg/mL

25pg/mL

12.5pg/mL

6.25pg/mL

1.56pg/mL

2.  加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)  、待

测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液  40μ l,然后再加待测样品  10μ l(样品最终稀释度为  5  倍)   。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.  温育:用封板膜封板后置  37℃温育  30  分钟。

4.  配液:将  20  倍浓缩洗涤液用蒸馏水  20  倍稀释后备用。

5.  洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置  30  秒后弃去,

如此重复  5  次,拍干。

6.  加酶:每孔加入酶标试剂  50μ l,空白孔除外。

7.  温育:操作同  3

8.  洗涤:操作同  5

9.  显色:每孔先加入显色剂  A50μ l,再加入显色剂  B50μ l,轻轻震荡混匀,37℃避光显色 15  分钟.

10.  终止:每孔加终止液  50μ l,终止反应(此时蓝色立转黄色)  。

11.  测定:以空白空调零,450nm  波长依序测量各孔的吸光度(OD  值)  。 测定应

在加终止液后  15  分钟以内进行。

注意事项:

1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡  15-30  分钟后方可使用,酶标包被板开封后

如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间

最好控制在  5  分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本  OD

值大于标准品孔第一孔的  OD  值)  ,请先用样品稀释液稀释一定倍数(n  倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)  。

5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.  底物请避光保存。

7.  严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.  所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.  本试剂不同批号组分不得混用。

计算:                                        

以标准物的浓度为横坐标,OD  值为纵坐标,

在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的  OD

值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释

倍数;或用标准物的浓度与  OD  值计算出标                

准曲线的直线回归方程式,将样品的  OD  

代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释

倍数,即为样品的实际浓度。

(此图仅供参考)

试剂盒性能:

1.样品线性回归与预期浓度相关系数  R  值为  0.990  以上。

2.批内与批见应分别小于  9%和  11%

3.保存条件及有效期:

a.试剂盒保存:2-8℃。

b.有效期:6  个月

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