检测原理

检测范围： 96T 15pg/mL - 400pg/mL 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中腺苷(Adenosine)含量。 实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人腺苷(Adenosine)水平。用纯化的人腺苷 (Adenosine)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入腺苷(Adenosine)， 再与 HRP 标记的腺苷(Adenosine)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤 后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的 黄色。颜色的深浅和样品中的腺苷(Adenosine)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸 光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人腺苷(Adenosine)浓度。

样品收集、处理及保存方法

1.   血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.   血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.   细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.   组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.   保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

操作注意事项

1.   试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.   实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.   浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.   严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.   所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成

注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、10、20、40、80、160 pg/mL

试剂的准备

20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

洗板方法

1.   手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。

2.   自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步骤

1.   从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.   设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.   样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

4.   除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.   弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.   每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.   每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

结果判断

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

试剂盒性能

1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。

2. 灵敏度：最低检测浓度小于1.0 pg/mL。

3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

6. 有效期：6个月

免责声明

1.    试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。

2.    严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。